Western Blot實驗作為普遍的一種蛋白研究方法之一，普遍應(yīng)用于科研領(lǐng)域，本文重點介紹WB實驗中常用的轉(zhuǎn)印膜：PVDF與NC膜
• PVDF 轉(zhuǎn)印膜：一種聚偏氟乙烯（ PVDF）微孔膜，用于從各種凝膠基質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)，具有高強度、可重復(fù)剝離、高化學(xué)兼容性及結(jié)構(gòu)均一穩(wěn)定等優(yōu)點。該系列轉(zhuǎn)印膜對蛋白質(zhì)有很高的結(jié)合能力，可提供優(yōu)異的靈敏度和低的背景。
• NC轉(zhuǎn)印膜：轉(zhuǎn)印膜是純的、無支持的硝酸纖維素微孔膜，用于從各種凝膠基質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)。該系列轉(zhuǎn)印膜對蛋白質(zhì)有較高的結(jié)合能力，可提供優(yōu)異的靈敏度和低的背景。
WB是生物學(xué)研究中常用的蛋白質(zhì)檢測技術(shù)。
而轉(zhuǎn)印膜作為WB的核心，其選擇直接影響實驗結(jié)果的成敗。
許多小伙伴在做WB實驗時，時?？鄲啦恢绾芜x擇膜材質(zhì)和膜孔徑，今天上海必泰就跟大家嘮嘮其中的區(qū)別以及該如何選擇。
兩種膜材質(zhì)有何區(qū)別？
| 區(qū)別 | PVDF膜 | NC膜 |
| 材料構(gòu)成 | 由聚偏氟乙烯制成,更堅韌耐用， 蛋白結(jié)合能力更強 | 由硝酸纖維素制成，具有良好的 蛋白結(jié)合能力，但較脆，易破損 |
| 蛋白結(jié)合能力 | 結(jié)合能力高達(dá)170-200 μg/cm2, 適合檢測低豐度蛋 | 結(jié)合能力約為80-100μg/cm2,適 合檢測中高豐度蛋白 |
| 靈敏度 | 靈敏度更高，尤其適合化學(xué)發(fā)光 (ECL)和熒光檢測 | 靈敏度適中，適合常規(guī)檢測 |
| 耐久性 | 耐化學(xué)性強，適合重復(fù)使用和長 時間保存 | 較脆弱，不適合長期保存或多次 剝離再檢測 |
| 激活原理 | 需要甲醇或乙醇浸濕激活，激活后 用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡，保持膜的活性， 確保后續(xù)轉(zhuǎn)膜效果 | 具有親水性，無需激活可直接使用 |
兩種膜孔徑如何選擇？
選到合適材質(zhì)的膜之后，還需要根據(jù)檢測蛋白的大小，選擇合適的膜孔徑。
轉(zhuǎn)印膜的膜孔徑通常有兩種大小:0.22μm和0.45μm。
| 0.22um孔徑 | 0.45um孔徑 |
特別適用于分子量小于20kDa的蛋白 可以有效減少小分子量蛋白的滲漏。 | 更加常用，特別適用于分 子量大于20kDa的蛋白。 |
PVDF轉(zhuǎn)印膜
- 具有很高的機械強度，不易破裂或卷曲
- 具有背景低、溶劑相容性廣，著色能力優(yōu)異等優(yōu)點
- 兼容麗春紅、考馬斯亮藍(lán)染色劑、Syproruby等多種染料，適用于化學(xué)發(fā)光、常規(guī)顯色、染色、同位素和熒光等方法進(jìn)行檢測
NC轉(zhuǎn)印膜
- 具有良好的結(jié)合載量，且背景很低，但機械強度低于PVDF膜
- 兼容麗春紅、酰胺黑等多種染料，適用于化學(xué)發(fā)光、常規(guī)顯色、染色、同位素和熒光等方法進(jìn)行檢測
